MeiraGTx Holdings plc a annoncé que la société exposera huit posters et fera une présentation orale au congrès annuel 2023 de la Société européenne de thérapie génique et cellulaire (ESGCT), qui se tiendra du 24 au 27 octobre 2023 à Bruxelles, en Belgique. Poster #122 : Développement d'alternatives à la lyse cellulaire au Triton X-100 pour la récupération primaire d'AAV2, AAV5 et AAV8 ; Catégorie : AAV & vecteurs non intégratifs ; Le Triton X-100 est un détergent efficace pour la récupération des produits biologiques des compartiments intracellulaires, mais son utilisation est maintenant interdite par la réglementation REACH (Registration, Evaluation, Authorisation and Restriction of Chemicals) car sa dégradation génère un composé qui a un impact négatif sur la vie aquatique. Ce travail visait à développer des méthodes alternatives au Triton X-100 pour la récupération du virus adéno-associé (AAV) à partir de cellules de rein embryonnaire humain 293, qui étaient conformes à REACH, compatibles avec les bonnes pratiques de fabrication, n'affectaient pas la qualité du produit et montraient une récupération comparable du produit par rapport à la lyse avec le Triton X-100.

Deux méthodes alternatives de libération d'AAV ont été évaluées pour les sérotypes AAV2, AAV5 et AAV8 : 1) Une méthode de libération hyperosmotique sans détergent a d'abord été testée à l'échelle de la microplaque à l'aide d'un plan d'expérience composite central, avant de passer à l'échelle du réacteur à cuve agitée (STR) de 250 ml. 2) Lorsqu'elle ne convenait pas, une méthode de lyse utilisant le détergent Deviron C16 a été évaluée à l'échelle du STR de 250 ml avec des concentrations allant de 0,1 à 0,5 %. Enfin, les conditions réussies pour l'une ou l'autre méthode ont été portées à l'échelle de 10 L STR.

Pour le sérotype AAV8, une méthode hyperosmotique de libération de l'AAV a utilisé l'ajout de 400 mM NaCl et une incubation de 2 heures, conduisant à une récupération d'environ 70 % du VG par rapport à l'ancienne méthode au Triton X-100. Pour les sérotypes AAV2 et AAV5, une méthode de lyse Deviron C16 à 0,5 % s'est avérée la plus appropriée, entraînant des récupérations de VG de 87 % et 97 % par rapport à la libération d'AAV avec le Triton X-100, respectivement. Aucune modification du processus en aval n'a été nécessaire pour adapter ces méthodes alternatives.

En outre, les deux méthodes ont pu être adaptées à une échelle de 10 L de STR, et les impuretés liées au processus, y compris l'ADN résiduel et les protéines de cellules hôtes, ainsi que la puissance du produit, n'ont pas été affectées par ces méthodes. En conclusion, cette étude démontre deux méthodes alternatives optimisées de libération d'AAV pour remplacer l'utilisation de Triton X-100 qui ont montré des profils comparables de récupération et de qualité du produit. Poster #167 : Potency assay cell line development for ocular gene therapy vectors ; Catégorie : AAV & vecteurs non intégratifs ; Lors de la production de produits pharmaceutiques GMP AAV, la capacité d'évaluer leur puissance est une partie essentielle de la libération et de la stabilité.

Les tests de puissance basés sur les cellules sont une exigence réglementaire pour la commercialisation des thérapies géniques AAV, mais la faible transductibilité des AAV in vitro ainsi que l'incapacité à tester l'expression en raison de l'utilisation de promoteurs spécifiques aux tissus entravent le développement de tests efficaces et robustes. De même, la recherche préclinique de base, pour laquelle des tests faciles à mettre en œuvre pour des expériences et des itérations plus rapides sont souhaitables, souffre des mêmes limitations. La société a donc entrepris d'examiner les moyens d'accroître la transductibilité des vecteurs et d'établir la transactivation du promoteur oculaire dans les lignées cellulaires les plus couramment utilisées (HEK293 et HeLa).

La société a évalué différentes méthodes pour augmenter la transductibilité des vecteurs AAV5 et AAV8 ainsi que pour trans-activer les promoteurs spécifiques des photorécepteurs (Rhodopsine kinase) et de l'EPR (RPE65). Des expériences de dosage ont permis d'identifier de puissants trans-activateurs médiés par dCas9 pour les deux promoteurs et d'établir une supplémentation en facteurs exogènes qui a augmenté la transductibilité des deux capsides de plusieurs fois par rapport à la ligne de base. D'autres études permettront de combiner ces éléments dans une plateforme d'essai d'activité in vitro sur cellules pour la libération de lots selon les BPF et les essais de stabilité.

Poster #324 : Utilisation de la modélisation mécaniste pour concevoir un processus de plate-forme pour la séparation des capsides AAV pleines et vides ; Catégorie : Fabrication Les virus adéno-associés sont relativement nouveaux dans le domaine des modalités biopharmaceutiques et sont utilisés pour délivrer un gène thérapeutique à un patient. Au cours de leur production en amont, des processus cellulaires distincts sont utilisés pour produire la capside virale et le transgène thérapeutique, et pour emballer le transgène dans la capside. Cela conduit à l'expression de capsides vides qui doivent être éliminées au cours du processus en aval, car elles peuvent stimuler une réponse immunitaire chez le patient.

La séparation des capsides vides présente un défi en raison de la similitude des propriétés entre les capsides vides et les capsides pleines. La proportion de capsides vides peut varier considérablement et atteindre 90 % en fonction de la maturité du processus en amont, ce qui accroît encore la difficulté de réaliser cette séparation. La plupart des tentatives se sont concentrées sur l'utilisation de la chromatographie d'échange d'anions pour exploiter la différence de charge afin de réaliser cette séparation.

Toutefois, les approches publiées sont très diverses, certains groupes utilisant différents types de matrices (résines, membranes et monolithes), de conditions de traitement et d'additifs. La société a précédemment démontré que le partitionnement faible peut être utilisé pour maximiser l'enrichissement des capsides complètes, ce qui augmente encore les options disponibles pour cette séparation. L'établissement d'un processus de plate-forme implique généralement la sélection d'un certain nombre d'options tout en utilisant des heuristiques pour restreindre l'espace de conception et réduire la charge expérimentale.

Cela conduit généralement à comparer les options de processus dans des conditions sous-optimales et il y a un risque que la plateforme optimale ne soit pas identifiée. Cette présentation se concentrera sur le travail effectué pour démontrer que les modèles mécanistes peuvent être utilisés pour identifier une plateforme optimale pour l'enrichissement des capsides complètes d'AAV2. Dans cette étude, nous avons développé des modèles mécanistes pour la séparation des capsides AAV2 vides et pleines pour trois matrices AEX qui s'étaient révélées prometteuses lors de l'évaluation expérimentale.

Ces modèles ont ensuite été utilisés pour examiner une série de conditions de traitement (concentrations de sel, rapports de charge) et les modes d'opération (liaison et élution, écoulement, partitionnement faible) et identifier les conditions optimales pour chaque matrice. Enfin, les conditions optimales identifiées ont été vérifiées expérimentalement.